Diferența dintre nitroceluloză și membrană de nailon

Diferența cheie între nitroceluloză și membrana de nailon este că membranele de nitroceluloză au un potențial ridicat de imobilizare a proteinelor, în timp ce membranele de nailon au un potențial ridicat de imobilizare a acidului nucleic. Cu toate acestea, ambele tipuri de membrane sunt frecvent utilizate în tehnicile de ștergere.

1. Care este diferența dintre nitroceluloză și membranele PVDF?
2. Ce este membrana nitrocelulozică?
3. De ce membrana nitroceluloză este utilizată în sudul blotării?
4. Cum se leagă proteinele de membranele nitrocelulozice?
5. De ce membrana PVDF este activată de metanol?
6. Care este dimensiunea porilor nitrocelulozei?
7. Cum utilizați membrana de nitroceluloză?
8. Pentru ce se folosește nitroceluloză?
9. Cum păstrați membranele PVDF?
10. De ce ADN-ul este transferat la o membrană de nailon?
11. Se mai folosește Southern blot?
12. Care sunt pașii în Southern Blotting?

Care este diferența dintre nitroceluloză și membranele PVDF?

Membranele PVDF au o capacitate mai mare de legare a proteinelor decât nitroceluloză. Capacitatea de legare a proteinelor PVDF variază de la 150-200 pg de proteină / cm² iar nitroceluloză variază între 80-100 pg de proteină / cm². Deși PVDF are o capacitate de legare mai mare, aceasta ar putea duce la creșterea fundalului în anumite circumstanțe.

Ce este membrana nitrocelulozică?

Membranele nitrocelulozice sunt o matrice populară utilizată în ștergerea proteinelor datorită afinității lor ridicate de legare a proteinelor, compatibilității cu o varietate de metode de detectare (chemiluminescență, cromogenă și fluorescență) și capacității de a imobiliza proteinele, glicoproteinele sau acizii nucleici..

De ce membrana nitroceluloză este utilizată în sudul blotării?

În protocolul original, membrana de nitroceluloză a fost utilizată pentru blot în caz de Southern blot, dar în ultima perioadă membranele de nailon au fost implementate pentru procesul de blotting datorită capacității lor de a lega mai mult cantitate de ADN eficient, ceea ce permite ca Southern blot să fie efectuată. cu o cantitate mai mică de ...

Cum se leagă proteinele de membranele nitrocelulozice?

Moleculele proteice se leagă de membranele nitrocelulozei prin interacțiuni hidrofobe în timp ce moleculele se leagă de membranele PVDF prin interacțiuni hidrofobe și dipol.

De ce membrana PVDF este activată de metanol?

O clătire scurtă (15-30 secunde) în metanol (sau alt alcool 100% (etanol sau izopropanol)) înainte de transferul Western va „hidrata” membrana și va permite transferul îmbunătățit și legarea de proteine. Membranele nitrocelulozice sunt hidrofile, deci pot fi complet hidratate de tampoane apoase.

Care este dimensiunea porilor nitrocelulozei?

Membrana de nitroceluloză de 0,2 µm a porțiunii Bio-Rad este densă 100% nitroceluloză. Nitroceluloză pură este membrana cea mai frecvent utilizată pentru transferul atât de proteine, cât și de acizi nucleici.

Cum utilizați membrana de nitroceluloză?

Nitroceluloză - Așezați membrana direct într-un vas de mică adâncime care conține 50 ml de tampon de transfer 1X timp de câteva minute. Hârtie de filtru - Înmuiați scurt hârtia de filtru în tamponul de transfer 1X imediat înainte de utilizare. Gel — Folosiți gelul imediat după alergare.

Pentru ce se folosește nitroceluloză?

Guncottonul, sau nitroceluloză (cunoscut și sub numele de trinitroceluloză și azotat de celuloză) este un exploziv ușor, utilizat în rachete, propulsori, baze de cerneală tipografică, finisare piele și celuloid (un amestec de nitroceluloză și camfor; folosit pentru prima dată la fabricarea bilelor de biliard).

Cum păstrați membranele PVDF?

Pentru a stoca membrana NC sau PVDF transferată de proteine ​​pentru o perioadă mai lungă de timp, este mai bine să uscați membrana și apoi să o păstrați la -20^oC fără pliere. Pentru membrana PVDF, clătiți doar cu metanol înainte de a șterge.

De ce ADN-ul este transferat la o membrană de nailon?

Southern Blots

1). ADN-ul șters este de obicei atașat covalent la membrana de nailon prin expunerea scurtă a petei la lumina UV. Transferul ADN-ului către membrana robustă este necesar, deoarece gelul fragil s-ar destrăma în timpul următoarelor două etape ale procesului.

Se mai folosește Southern blot?

Astăzi, Southern Blot a fost în mare parte înlocuit de PCR în timp real pentru a răspunde la aceleași întrebări experimentale. PCR în timp real detectează și cuantifică o genă sau o secvență de ADN de interes prin înregistrarea abundenței ADN pe tot parcursul procesului de amplificare, mai degrabă decât doar la sfârșit ca în PCR standard.

Care sunt pașii în Southern Blotting?

Ghid pas cu pas pentru analiza Southern Blot

1. Pasul 1 Digestia ADN-ului.
2. Pasul 2 Electroforeza pe gel.
3. Pasul 3 Ștergere.
4. Pasul 4 Etichetarea sondei.
5. Pasul 5 Hibridizare & spălat.
6. Pasul 6 Detectare.