Diferența dintre nitroceluloză și PVDF

În timp ce atât membranele de nitroceluloză, cât și PVDF sunt utilizate pentru Western blot și analiza aminoacizilor, nitroceluloză este ideală în detectarea proteinelor cu greutate moleculară mică, în timp ce PVDF este mai potrivită pentru detectarea proteinelor cu greutate moleculară mai mare.

1. Care este diferența dintre membranele PVDF și nitroceluloză?
2. Care sunt avantajele și dezavantajele PVDF și nitrocelulozei?
3. De ce se folosește nitroceluloză în Western blot?
4. Ce este o membrană PVDF?
5. Ce înseamnă PVDF?
6. De ce îmbibați membrana PVDF în metanol?
7. Cum păstrați membranele PVDF?
8. Poate proteina să treacă prin membrana PVDF?
9. Cum activezi membrana nitrocelulozică?
10. De ce se utilizează glicina în rularea tamponului?
11. Care este dimensiunea porilor nitrocelulozei?
12. Care este principiul Western blot?

Care este diferența dintre membranele PVDF și nitroceluloză?

Membranele PVDF au o capacitate mai mare de legare a proteinelor decât nitroceluloză. Capacitatea de legare a proteinelor PVDF variază de la 150-200 pg de proteină / cm² iar nitroceluloză variază între 80-100 pg de proteină / cm². Deși PVDF are o capacitate de legare mai mare, aceasta ar putea duce la creșterea fundalului în anumite circumstanțe.

Care sunt avantajele și dezavantajele PVDF și nitrocelulozei?

3. Care sunt avantajele și dezavantajele PVDF și nitrocelulozei? PVDF este un plastic foarte nereactiv care imobilizează proteinele pe baza afinității sale nespecifice pentru aminoacizi. PVDF este preferat în locul nitrocelulozei, deoarece oferă o mai bună retenție a proteinelor, rezistență și compatibilitate chimică.

De ce se folosește nitroceluloză în Western blot?

Membranele nitrocelulozice sunt o matrice populară utilizată în ștergerea proteinelor datorită afinității lor ridicate de legare a proteinelor, compatibilității cu o varietate de metode de detectare (chemiluminescență, cromogenă și fluorescență) și capacității de a imobiliza proteinele, glicoproteinele sau acizii nucleici..

Ce este o membrană PVDF?

Membranele cu fluorură de poliviniliden (PVDF) leagă biomoleculele prin interacțiuni hidrofobe. Porii membranei măresc suprafața de legare a suprafeței în timp ce restricționează dimensiunile proteinelor legate. ... Are o capacitate mai mare de legare a proteinelor și o retenție mai mare decât membranele de 0,45 µm.

Ce înseamnă PVDF?

PVDF este abrevierea pentru fluorură de poliviniliden, care poate fi denumită și PVF2. Acest polimer face parte dintr-o clasă de materiale cunoscute sub numele de fluorocarburi sau fluoropolimeri, care se caracterizează prin stabilitate termică ridicată și rezistență chimică excelentă.

De ce îmbibați membrana PVDF în metanol?

O clătire scurtă (15-30 secunde) în metanol (sau alt alcool 100% (etanol sau izopropanol)) înainte de transferul Western va „hidrata” membrana și va permite transferul îmbunătățit și legarea de proteine. Membranele nitrocelulozice sunt hidrofile, deci pot fi complet hidratate de tampoane apoase.

Cum păstrați membranele PVDF?

Pentru a stoca membrana NC sau PVDF transferată de proteine ​​pentru o perioadă mai lungă de timp, este mai bine să uscați membrana și apoi să o păstrați la -20^oC fără pliere. Pentru membrana PVDF, clătiți doar cu metanol înainte de a șterge.

Poate proteina să treacă prin membrana PVDF?

Transferul inițial efectuat peste noapte (16 ore) la 30 V a eșuat deoarece proteinele mici și mijlocii (mai mici de 100 kDa) s-au transferat direct prin membrană (așa cum este evident din colorarea Ponceau a petei și colorarea Coomassie a gelului).

Cum activezi membrana nitrocelulozică?

Au menționat că: Nitroceluloză - Așezați membrana direct într-un vas de mică adâncime care conține 50 ml de tampon de transfer 1X timp de câteva minute. Hârtie de filtru - Înmuiați scurt hârtia de filtru în tamponul de transfer 1X imediat înainte de utilizare. Gel — Folosiți gelul imediat după alergare.

De ce se utilizează glicina în rularea tamponului?

Glicina se află în tamponul de rulare, care este de obicei la un pH de 8,3. ... Când se aplică un câmp electric, anionii glicinați au atins tamponul de stivuire cu pH 6,8 și se schimbă pentru a deveni în principal zwitterions cu glicină încărcată neutru. Asta înseamnă că se mișcă încet prin stratul de stivuire spre anod din cauza lipsei lor de încărcare.

Care este dimensiunea porilor nitrocelulozei?

Membrana de nitroceluloză de 0,2 µm a porțiunii Bio-Rad este densă 100% nitroceluloză. Nitroceluloză pură este membrana cea mai frecvent utilizată pentru transferul atât de proteine, cât și de acizi nucleici.

Care este principiul Western blot?

Western blot (proteina sau imunoblotarea) este un test rapid și sensibil pentru detectarea și caracterizarea proteinelor. Se bazează pe principiul imunocromatografiei în care proteinele sunt separate în gel de poliacrilamidă în funcție de greutatea lor moleculară.