Cum funcționează tripsina în cultura celulară

Când este adăugată la o cultură celulară, tripsina descompune proteinele care permit celulelor să adere la vas. ... Tripsina, o enzimă frecvent întâlnită în tractul digestiv, poate fi utilizată pentru a „digera” proteinele care facilitează aderența la recipient și între celule.

1. Cum funcționează tripsina?
2. De ce tripsina EDTA este utilizată în cultura celulară?
3. Cum ucide tripsina celulele?
4. Cum inhibă serul tripsina?
5. Ce face tripsina în organism?
6. Cum este inactivată tripsina în cultură?
7. Poate EDTA să omoare celulele?
8. De ce folosim FBS în cultura celulară?
9. Este EDTA toxic pentru celule?
10. Ce se întâmplă dacă lăsați celulele în tripsină prea mult timp?
11. Cum opresc activitatea de tripsină?
12. Cât durează tripsina?

Cum funcționează tripsina?

Tripsina este o enzimă care ne ajută să digerăm proteinele. În intestinul subțire, tripsina descompune proteinele, continuând procesul de digestie care a început în stomac. Poate fi denumită și o enzimă proteolitică sau proteinază. Tripsina este produsă de pancreas într-o formă inactivă numită tripsinogen.

De ce tripsina EDTA este utilizată în cultura celulară?

EDTA acționează ca un chelator metalic, care se adaugă soluțiilor de tripsină pentru a spori activitatea. EDTA este adăugat pentru a îndepărta calciul și magneziul de pe suprafața celulei, ceea ce permite tripsinei să hidrolizeze legături peptidice specifice. Motivul principal al utilizării EDTA împreună cu tripsina este îndepărtarea aderenței celule la celule.

Cum ucide tripsina celulele?

Diferite enzime proteolitice sunt utilizate pentru a detașa celulele de substratul aderent, dintre care se folosește cel mai frecvent tripsina, membru al serinei proteazei. ... Incubația pe termen lung cu concentrație ridicată de tripsină dăunează celulelor prin striparea proteinelor de pe suprafața celulei și uciderea celulelor.

Cum inhibă serul tripsina?

Bună, Tripsina este o endopeptidază, care digeră proteinele. ... Mediul de cultură celulară cu ser este adăugat pentru inactivarea tripsinei, altfel proteoliza în curs ar duce la deteriorarea celulelor. Serul conține mulți inhibitori de protează, care opresc tripsina, în principal alfa-1-antitripsina.

Ce face tripsina în organism?

Tripsina este o enzimă care ajută la digestie. O enzimă este o proteină care accelerează o anumită reacție biochimică. Tripsina se găsește în intestinul subțire.

Cum este inactivată tripsina în cultură?

Tripsina este inhibată de ser care furnizează cationi divalenți precum calciu și magneziu care joacă un rol atât în ​​procesul de semnalizare intra, cât și intercelular, adică formarea CAM-urilor, astfel serul este de obicei adăugat în recipient odată ce celulele s-au detașat - acest lucru poate fi confirmat prin observarea sub microscop.

Poate EDTA să omoare celulele?

A. Utilizați EDTA de 5 mM sau mai mare NOTĂ: prea mult EDTA vă poate ucide celulele b. Accutase și Accumax sunt produse de disociere a celulelor vândute de tehnologiile inovatoare care pot ajuta la menținerea suspensiilor cu celule unice.

De ce folosim FBS în cultura celulară?

Serul bovin fetal (FBS) este utilizat ca supliment de creștere pentru cultura de celule in vitro a celulelor eucariote. ... FBS conține factori de creștere și niveluri foarte scăzute de anticorpi, permițând versatilitatea în multe aplicații diferite de cultură celulară.

Este EDTA toxic pentru celule?

Nu s-a observat toxicitate atunci când celulele au fost expuse la 100 microM Zn- sau Fe-EDTA, dar aceeași concentrație de Cu-EDTA a fost la fel de toxică ca Na-EDTA. Expunerea continuă a culturilor de celule la 5 microM Na- sau Zn-EDTA timp de până la 7 săptămâni nu a dat indicii de toxicitate.

Ce se întâmplă dacă lăsați celulele în tripsină prea mult timp?

Incubarea celulelor cu o concentrație prea mare de tripsină pentru o perioadă prea lungă de timp va deteriora membranele celulare și va ucide celulele. Dacă nu sunteți sigur cu privire la concentrația de tripsină de utilizat, utilizați o concentrație scăzută.

Cum opresc activitatea de tripsină?

FBS conține inhibitori de protează în special α1-antitripsină, care inhibă activitatea tripsinei. Chiar înainte de adăugarea de tripsină, celulele trebuie spălate cu PBS pentru a elimina orice rest de FBS, deoarece acest lucru ar putea împiedica procesul de tripsinizare.

Cât durează tripsina?

Dacă doriți să o păstrați pentru o perioadă mai lungă de timp, ar trebui să o pregătiți conform descrierii date de furnizorul dvs. Ca exemplu pentru o Tripsină din pancreasul bovin (numărul produsului T 4665, SIGMA-ALDRICH), „soluțiile în 1 mM HCL (pH 3) sunt stabile timp de aproximativ 1 an când sunt alicotate și depozitate la -20 ° C.