protocolul culturii celulei edta tripsină

Procedură

Se îndepărtează mediul din vasul de cultură prin aspirație și se spală monostratul cu o soluție de sare fără Ca.²⁺ și Mg²⁺ pentru a elimina toate urmele de ser. ...
Distribuiți suficientă soluție de tripsină sau tripsină / EDTA în vasul (vasele) de cultură pentru a acoperi complet monostratul celulelor și plasați-l în incubator la 37 ° C timp de ~ 2 minute.

Cum pregătiți soluția de tripsină EDTA pentru cultura celulară?
De ce tripsina EDTA este utilizată în cultura celulară?
Cum se realizează subcultivarea celulelor aderente folosind tripsina EDTA și EDTA singur?
Cum dezgheți tripsina EDTA?
Poate ucide tripsina celulele?
Ce putem adăuga culturii pentru a inhiba tripsina?
Poate EDTA să omoare celulele?
De ce inhibă serul tripsina?
Este EDTA toxic pentru celule?
De ce folosim tripsina?
De ce speli celulele cu PBS?
De ce speli celulele cu PBS înainte de a adăuga tripsină?

Cum pregătiți soluția de tripsină EDTA pentru cultura celulară?

Se adaugă 12 până la 15 ml de mediu de cultură celulară proaspăt într-un balon nou și se echilibrează acest mediu la pH-ul și temperatura corespunzătoare. Colectați suspensia celulară, numărați-o și / sau împărțiți-o și distribuiți celulele în balonul nou pregătit. Consultați foaia de produse a liniei celulare pentru rapoartele de subcultivare recomandate.

De ce tripsina EDTA este utilizată în cultura celulară?

EDTA acționează ca un chelator metalic, care se adaugă soluțiilor de tripsină pentru a spori activitatea. EDTA este adăugat pentru a îndepărta calciul și magneziul de pe suprafața celulei, ceea ce permite tripsinei să hidrolizeze legături peptidice specifice. Motivul principal al utilizării EDTA împreună cu tripsina este îndepărtarea aderenței celule la celule.

Cum se realizează subcultivarea celulelor aderente folosind tripsina EDTA și EDTA singur?

Pipetați tripsina / EDTA pe monostratul de celule spălate folosind aproximativ 1 ml per 25cm2 de suprafață. Rotiți balonul pentru a acoperi monostratul cu tripsină. Decantează excesul de tripsină. Întoarceți balonul în incubator și lăsați 2-10 minute.

Cum dezgheți tripsina EDTA?

Scoateți soluția de tripsină / EDTA din depozitare și puneți-o peste noapte la 2 ° C până la 8 ° C. 2. Transferați sticla într-o baie de apă la 37 ° C și agitați ușor sticla pentru a amesteca eventualele substanțe dizolvate. Nu păstrați soluția de tripsină / EDTA la 37 ° C mai mult decât este necesar.

Poate ucide tripsina celulele?

Incubarea celulelor cu o concentrație prea mare de tripsină pentru o perioadă prea lungă de timp va deteriora membranele celulare și va ucide celulele.

Ce putem adăuga culturii pentru a inhiba tripsina?

Tripsina este inhibată de ser care furnizează cationi divalenți precum calciu și magneziu care joacă un rol atât în procesul de semnalizare intra, cât și intercelular, adică formarea CAM-urilor, astfel serul este de obicei adăugat în recipient odată ce celulele s-au detașat - acest lucru poate fi confirmat prin observarea sub microscop.

Poate EDTA să omoare celulele?

A. Utilizați EDTA de 5 mM sau mai mare NOTĂ: prea mult EDTA vă poate ucide celulele b. Accutase și Accumax sunt produse de disociere a celulelor vândute de tehnologiile inovatoare care pot ajuta la menținerea suspensiilor cu celule unice.

De ce inhibă serul tripsina?

Bună, Tripsina este o endopeptidază, care digeră proteinele. În procesul de tripsinizare, proteinele extracelulare sunt digerate, ceea ce duce la detașarea celulelor din fundul vasului de cultură. ... Serul conține mulți inhibitori de protează, care opresc tripsina, în principal alfa-1-antitripsina. Sper că acest lucru vă ajută!

Este EDTA toxic pentru celule?

Nu s-a observat toxicitate atunci când celulele au fost expuse la 100 microM Zn- sau Fe-EDTA, dar aceeași concentrație de Cu-EDTA a fost la fel de toxică ca Na-EDTA. Expunerea continuă a culturilor de celule la 5 microM Na- sau Zn-EDTA timp de până la 7 săptămâni nu a dat indicii de toxicitate.

De ce folosim tripsina?

Tripsina este o enzimă care ne ajută să digerăm proteinele. În intestinul subțire, tripsina descompune proteinele, continuând procesul de digestie care a început în stomac. Poate fi denumită și o enzimă proteolitică sau proteinază. Tripsina este produsă de pancreas într-o formă inactivă numită tripsinogen.

De ce speli celulele cu PBS?

În cultura celulară în timpul spălării PBS este necesară spălarea pentru a îndepărta serul mediului, astfel încât tripsina să poată detașa celulele de pe placă, alt ser înțelept poate inactiva tripsina.

De ce speli celulele cu PBS înainte de a adăuga tripsină?

Înainte să-l adăugați la celule, trebuie să spălați mediul de cultură celulară, deoarece tripsina ar descompune și proteinele prezente în mediu, cum ar fi FCS, reducându-i activitatea înainte de a ajunge la celule.